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無菌檢測(cè)儀不使用集菌儀和使用集菌儀的差別

來源: 發(fā)布時(shí)間:2018-11-19

OOS(outofspecification,超限度、超規(guī)格)結(jié)果,是指產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)測(cè)試中超出已經(jīng)建立的可接受標(biāo)準(zhǔn)的單個(gè)或一系列結(jié)果。無菌產(chǎn)品的陽性結(jié)果、微生物限度試驗(yàn)超出行動(dòng)值或超過規(guī)格、內(nèi)毒素試驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)準(zhǔn)等均為OOS結(jié)果《中國藥典》2015年版m和新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(GMP)增加了OOS調(diào)查章節(jié),對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室00S結(jié)果的調(diào)查做出了較為詳細(xì)的闡述和實(shí)例分析,要求任何OOS結(jié)果必須按照書面規(guī)程進(jìn)行完整的調(diào)查。因?yàn)橹挥写_定了OOS結(jié)果產(chǎn)生的原因并判定其是否有效,進(jìn)而才能制訂完善的預(yù)防和整改措施,以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,實(shí)驗(yàn)室建立OOS調(diào)查處理程序,對(duì)OOS結(jié)果進(jìn)行科學(xué)、及時(shí)、有效的調(diào)查分析處理是十分必要的微生物在自然環(huán)境中無處不在,并可能會(huì)隨檢驗(yàn)人員、檢驗(yàn)用器材以及檢品的包裝容器進(jìn)入檢驗(yàn)環(huán)境。因此,關(guān)于微生物檢驗(yàn)中藥品的無菌檢査項(xiàng)目,新版藥典對(duì)其操作環(huán)境提出了更高要求,新版GMP也加強(qiáng)了對(duì)無菌操作環(huán)境空氣微生物、表面微生物以及人員手套和操作服表面微生物的監(jiān)測(cè)頻率,并做出了明確規(guī)定。而對(duì)于無菌檢査OOS結(jié)果的調(diào)査,需核實(shí)的相關(guān)記錄和影響因素更為繁雜?;谒膹?fù)雜性,OOS結(jié)果的調(diào)查須追溯到實(shí)驗(yàn)過程的每一個(gè)環(huán)節(jié),而對(duì)于它的變異性,調(diào)查過程又需針對(duì)不同的OOS結(jié)果著重分析調(diào)查相應(yīng)的不同環(huán)節(jié)。
對(duì)于微生物實(shí)驗(yàn)室OOS的調(diào)查,局限于每個(gè)檢驗(yàn)單位的技術(shù)水平和資源,同樣限于人類對(duì)微生物掌握的局限,不是每次的OOS調(diào)査都可以發(fā)現(xiàn)其根本原因,但通過此調(diào)査過程仍能夠幫助調(diào)查者找出超標(biāo)結(jié)果發(fā)生的可能原因并進(jìn)而采取糾正預(yù)防措施,基于風(fēng)險(xiǎn)分析,對(duì)相關(guān)批次產(chǎn)品做出最后處理決定'從而降低藥品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn),既是保證藥品質(zhì)量的重要工作,又是質(zhì)量體系持續(xù)改進(jìn)的原動(dòng)力。本文通過對(duì)4批無菌產(chǎn)品的無菌檢査實(shí)驗(yàn)全過程的回顧性分析和調(diào)查,探索導(dǎo)致無菌實(shí)驗(yàn)OOS結(jié)果的明確原因,以期建立微生物實(shí)驗(yàn)室完善的OOS調(diào)査方案。
1、材料、儀器與試劑
全自動(dòng)智能無菌集菌儀(上海秉越zw-2008)一次性使用全封閉集菌培養(yǎng)器顯微鏡AxioScopeA
全自動(dòng)微生物鑒定儀
酵母菌鑒定卡
無菌檢查樣品為4個(gè)批號(hào)的注射用頭孢噻膀鈉。
2、方法與結(jié)果
2.1實(shí)驗(yàn)方法
 
2.1.1藥品的無菌檢查
依照《中國藥典》2010年版_檢驗(yàn)注射用頭孢噻肟鈉的無菌檢查項(xiàng)目。
2.1.2鏡檢及鑒定
取陽性樣本,劃線TSA平板培養(yǎng)24~48h,按照儀器及試劑的使用說明,對(duì)經(jīng)過純化的微生物進(jìn)行革蘭氏染色,確定微生物形態(tài),然后根據(jù)形態(tài)選擇鑒定卡,使用全自動(dòng)微生物鑒定儀Vitek2Compact進(jìn)行鑒定。
 
2.2結(jié)果
 
4個(gè)批號(hào)的注射用頭孢噻肟鈉的無菌檢查檢驗(yàn)結(jié)果如表1所示:2號(hào)和4號(hào)樣品改良馬丁培養(yǎng)基均在第3天變渾濁。取改良馬丁培養(yǎng)液劃線TSA平板,30~35℃培養(yǎng)48h,平板上呈現(xiàn)白色、光滑、邊緣整齊、形態(tài)單一的菌落。
革蘭氏染色鏡檢結(jié)果為酵母菌。經(jīng)全自動(dòng)微生物鑒定儀Vitek2Compact鑒定,均為季也蒙假絲酵母。
 
3、OOS結(jié)果的調(diào)查和分析
依據(jù)新版GMP對(duì)OOS調(diào)查的要求,回顧性分析調(diào)查注射用頭孢噻肟鈉無菌檢查OOS結(jié)果產(chǎn)生的原因。
 
①日常監(jiān)控和驗(yàn)收記錄:
培養(yǎng)基的驗(yàn)收記錄、培養(yǎng)基的制備和滅菌記錄、檢驗(yàn)器具準(zhǔn)備和滅菌記錄、消毒液配置和無菌過濾記錄、潔凈室清潔消毒記錄、檢驗(yàn)員使用潔凈服的滅菌記錄和使用記錄、無菌檢驗(yàn)操作記錄以及環(huán)境監(jiān)控記錄等均未發(fā)現(xiàn)異常。
②人員:
甲和乙實(shí)驗(yàn)人員均能熟練掌握無菌檢驗(yàn)的流程、監(jiān)控要點(diǎn)和無菌操作規(guī)范。
③樣品:
確認(rèn)樣品的編號(hào)和批號(hào)無誤,無菌檢査取樣前,樣品西林瓶外觀正常,西林瓶蓋并未發(fā)現(xiàn)松動(dòng)的跡象。
④實(shí)驗(yàn)器具:
實(shí)驗(yàn)中使用的py330集菌器、一次件使用無菌注射器以及一次性使用無菌手套的無菌驗(yàn)收均符合規(guī)定,且用于當(dāng)天其他檢品的檢驗(yàn),并未發(fā)現(xiàn)污染情況。
⑤培養(yǎng)基及沖洗液和稀釋液:
無菌檢查用培養(yǎng)基的陰性對(duì)照均符合規(guī)定,且同批制備和滅菌的培養(yǎng)基用于同日檢查的其他檢品,并未發(fā)現(xiàn)污染情況。
⑥檢驗(yàn)環(huán)境:
現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境監(jiān)控的3皿沉降菌監(jiān)測(cè)的TSA平皿均未有菌落生長(zhǎng),并未出現(xiàn)污染情況。定期環(huán)境檢測(cè)表面菌符合規(guī)定,樣品無菌檢查當(dāng)日潔凈空調(diào)系統(tǒng)均運(yùn)行正常。
⑦不同檢驗(yàn)體系對(duì)結(jié)果判定造成的影響:
由于現(xiàn)行《中國藥典》無菌檢查使用的改良馬丁培養(yǎng)基不同于國際標(biāo)準(zhǔn)使用的TSB,將改良馬丁培養(yǎng)物劃線TSA平板上長(zhǎng)出的菌落接種至TSB培養(yǎng)液中in),24h后培養(yǎng)液即出現(xiàn)混濁現(xiàn)象。因此可以排除因檢驗(yàn)體系不同造成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
⑧菌株:
樣品檢出菌經(jīng)鑒定為季也蒙假絲酵母菌,比對(duì)曰常潔凈室監(jiān)控收集的菌株建立的菌庫,潔凈室中從未監(jiān)測(cè)到此種菌株。
⑨附加實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與分析:
通過以上分析,初步認(rèn)定無菌不合格為實(shí)驗(yàn)有效結(jié)果。但鑒于此次無菌檢驗(yàn)過程并未嚴(yán)格按照新版GMP和《中國藥典》2015年版規(guī)定的對(duì)檢驗(yàn)環(huán)境和人員的全面監(jiān)控,環(huán)境和人員帶來的污染仍有造成OOS結(jié)果的可能性,附加實(shí)驗(yàn)就是對(duì)檢驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行全面監(jiān)測(cè)。
現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境監(jiān)控按照新版GMP的要求實(shí)施,并增加對(duì)潔凈室回風(fēng)口浮游菌的監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)結(jié)果均符合規(guī)定。微生物監(jiān)測(cè)方面,除實(shí)驗(yàn)人員無菌服胸口處采集到一個(gè)菌落,其他均未有菌落生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)人員無菌服采集到的菌落為革蘭氏陽性球菌,經(jīng)鑒定為Kocuriakristinae(克氏庫克菌),此菌種曾在日常潔凈室監(jiān)控中不止一次檢出過,并未對(duì)樣品產(chǎn)生過污染。
4、結(jié)論與討論
OOS結(jié)果表明,并未在實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致OOS結(jié)果的明確原因,檢出菌也并非由于實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)過程帶來的污染,懷疑樣品本身被季也蒙假絲酵母菌所污染,從而導(dǎo)致無菌檢查的陽性結(jié)果。
通過對(duì)上述OOS的調(diào)查和分析,初步建立了微生物實(shí)驗(yàn)室OOS結(jié)果調(diào)查的分析方案,分別從人、機(jī)、料、法、環(huán)5個(gè)方面進(jìn)行闡述:
人——實(shí)驗(yàn)人員??疾烊藛T是否經(jīng)過相關(guān)檢驗(yàn)的培訓(xùn)和考核,是否了解該項(xiàng)檢驗(yàn)的流程和監(jiān)控要點(diǎn)。無菌區(qū)全體人員每年應(yīng)進(jìn)行一次再培訓(xùn)和資格的再確認(rèn),對(duì)無菌區(qū)人員操作服和手套表面的微生物監(jiān)測(cè)嚴(yán)格按新版GMP執(zhí)行;
機(jī)——實(shí)驗(yàn)中使用的儀器設(shè)備。檢查集菌儀等儀器近期使用記錄是否發(fā)現(xiàn)異常,參數(shù)設(shè)置是否正確。儀器的計(jì)量和校準(zhǔn)均需在有效期內(nèi),無菌區(qū)內(nèi)使用的儀器需定期消毒并定期進(jìn)行微生物的表面監(jiān)測(cè),使用的器具需經(jīng)滅菌消毒,一次性使用器具需經(jīng)質(zhì)量驗(yàn)收;
料——樣品、培養(yǎng)基、稀釋液和沖洗液。檢查剩余樣品的編號(hào)和批號(hào)是否準(zhǔn)確,樣品的外觀是否異常,瓶蓋是否有松脫現(xiàn)象以及樣品的前期存放條件和取樣方式是否合理。必要時(shí),對(duì)樣品的瓶蓋和瓶口等關(guān)鍵部位擦抹取樣,培養(yǎng)觀察;
檢查培養(yǎng)基質(zhì)量驗(yàn)收記錄和配制記錄,確認(rèn)配制和滅菌是否合理有效,是否用于其他樣品的檢驗(yàn),培養(yǎng)基、稀釋液和沖洗液的陰性對(duì)照應(yīng)符合規(guī)定;
法——檢驗(yàn)方法和依據(jù)。實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合設(shè)定實(shí)驗(yàn)和檢驗(yàn)依據(jù)的要求;
環(huán)——實(shí)驗(yàn)環(huán)境。檢查潔凈空調(diào)系統(tǒng)是否運(yùn)行正常,監(jiān)測(cè)記錄包括定期監(jiān)控記錄和實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境監(jiān)控記錄,是否符合潔凈度要求,清潔記錄顯示是否按時(shí)清潔,消毒液是否使用合理。另外,未確定OOS結(jié)果產(chǎn)生的明確原因時(shí),不能急于對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒處理,以免忽略了可能的環(huán)境污染因素。
 
微生物負(fù)荷和實(shí)驗(yàn)檢出菌的比對(duì)分析。實(shí)驗(yàn)室的微生物負(fù)荷,包括潔凈室的空氣微生物、表面微生物和人員操作服及手套的表面微生物。對(duì)日常環(huán)境監(jiān)控收集的菌株進(jìn)行有效鑒別和分析,建立潔凈室生物負(fù)載數(shù)據(jù)庫,可為微生物OOS調(diào)査提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
 
對(duì)檢出菌進(jìn)行鑒定,分析監(jiān)控收集的微生物分布和鑒定與陽性結(jié)果的相關(guān)性,當(dāng)發(fā)現(xiàn)與陽性菌株相近的菌株時(shí),可利用分子生物學(xué)方法比對(duì)陽性菌株與微生物負(fù)荷的同源性,為陽性菌的污染溯源提供依據(jù)。
此外,對(duì)不同實(shí)驗(yàn)會(huì)產(chǎn)生不同的OOS結(jié)果,可針對(duì)某些相關(guān)環(huán)節(jié)靈活考察。例如,針對(duì)不同的微生物,采用不同的監(jiān)測(cè)手段,陽性檢出菌為酵母菌時(shí),增加沙氏葡萄糖瓊脂用于環(huán)境監(jiān)控的附加實(shí)驗(yàn),則能夠更好地確認(rèn)環(huán)境中的該類微生物。
需要著重強(qiáng)調(diào)的是,檢出菌的鑒別對(duì)于OOS結(jié)果的調(diào)查非常關(guān)鍵,決定最后是否可以發(fā)現(xiàn)根本原因,應(yīng)該給予足夠重視。
綜上所述,微生物相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目OOS結(jié)果的調(diào)查工作量很大,且專業(yè)性強(qiáng),實(shí)驗(yàn)室不僅需要具備受過良好培訓(xùn)和具有豐富檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的工作人員,還需建立完善的OOS調(diào)查方案來規(guī)范調(diào)查操作。

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